Kimya, biyoloji ve tıpta pipet, genellikle bir ortam dağıtıcısı olarak, önceden belirlenmiş bir sıvı hacmini iletmek için kullanılan tipik bir laboratuvar aletidir. Pipetleme sonuçlarınızın başarısı, hassas çalışmalar yaparken pipet hacmini ne kadar doğru okuduğunuza bağlıdır. Doğru, yüksek kaliteli enstrümantasyon kullanmak, pipet hacimlerinin doğru şekilde okunmasını sağlamanın en iyi yoludur. Laboratuvarın doğruluk ve hassasiyet gereksinimleri artmaya devam ettikçe, ideal pipetleme tekniklerini anlamak ve mükemmelleştirmek kritik öneme sahiptir.
Pipetler bilimsel araştırmalarda kullanılır ve küçük miktarlardaki sıvıların doğru bir şekilde ölçülmesi ve aktarılması için yüksek hassasiyet gerektirir.
Ancak ekipman arızası veya operatör hatası pipet ölçüm hatalarının nedeni olabilir. Dağıtılan hacimdeki herhangi bir değişiklik, qPCR gibi deneylerin sonuçları ve tekrarlanabilirliği üzerinde bir etkiye sahip olabilir.
Pipet doğruluğunu etkileyen faktörler:
Sıcaklık
Doğru pipetleme sıcaklıktan büyük ölçüde etkilenir. Dağıtım cihazı ile sıvı arasındaki sıcaklık farkı en etkili faktördür. Isıl genleşmenin vakaya özgü etkileri sıvı yüzeyi ile piston arasındaki hava boşluğunda (ölü hava hacmi) meydana gelir. Diğer sonuçların yanı sıra bu, uca çekilen sıvı miktarını azaltabilir veya artırabilir.
Yoğunluk
Uçta çekilen sıvı miktarı yoğunluktan (kütle/hacim oranı) etkilenir. Su kullanılarak yapılan benzer bir prosedürden daha az yoğun sıvı aspire edilir. Daha az yoğun sıvılar için sonuçlar tam tersidir. Bu, esnek ölü hava hacmi ve Dünya'nın yer çekiminden kaynaklanır. Sıvı yoğunluğu da sıcaklıkla değişir. Tipik olarak, bir sıvının yoğunluğu da sıcaklıkla değişir. 20 derece / 68 derece F'de, suyun yoğunluğu tipik olarak 0.998 kg/dm3, etanolün yoğunluğu 0.79 kg/dm3 ve sülfürik asidin (95-98% h2SO4) yoğunluğu 1.84 kg/dm3'tür.
Yüksek
Doğruluk hava basıncı ve coğrafi irtifadan etkilenir. İrtifa ne kadar yüksekse hava basıncı o kadar düşük olur ve dönüşüm faktörü de o kadar düşük olur.
Ayrıca bazı sıvıların kaynama noktaları oda sıcaklığına yakın bir değere kadar düşer, bu da buharlaşma kayıplarını büyük ölçüde artırır.
Reaktif buharlaşması
Yüksek uçucu reaktifler, uca giren ve iç basıncı yükselten buharı emer. Bu nedenle, artan basınç nedeniyle sıvı sıkıldığında hatalar meydana gelir.
Yanlış pipetleme modu seçildi
Pipetleme sırasında operatörler genellikle geri veya ileri modun kullanılıp kullanılmayacağı konusunda rastgele veya öznel kararlar verirler. Ancak, viskoz numuneler ters modun kullanılacağı tek numuneler olmalıdır. Ters modda, piston numuneyi aspire etmek için tamamen bastırılır (ilk duraktan sonra) ve ardından numuneyi iletmek için yalnızca kısmen bastırılır (ilk durağa kadar). Bu nedenle, viskoz sıvılarla ileri modun kullanılması yetersiz iletimle sonuçlanırken, sulu çözeltilerle ters modun kullanılması aşırı iletimle sonuçlanır.
Eğimli pipetleme
Örnek kaybı, pipet ucu aspirasyon sırasında kap duvarına temas ettiğinde meydana gelir. Ek olarak, küçük hacimlerde pipetleme yaparken, pipeti açılı bir şekilde çekmek, yüzey gerilimi etkileri nedeniyle hacim değişikliklerine neden olabilir. Pipeti doğrudan kaptan çekmek hataları azaltır.